Saccharomyces cerevisiae populations and other yeasts associated with indigenous beers (chicha) of Ecuador

ABSTRACT Chicha, a type of beer made mainly with maize or cassava, is a traditional fermented beverage of the Andean region. There have only been a few studies on yeasts associated with chicha fermentation, and the species diversity occurring during the production of this beverage is not known. The objective of this study was to determine the biodiversity of yeasts in chicha, and to characterize the Saccharomyces cerevisiae populations associated with the production of chicha de jora, seven-grain chicha, chicha de yuca, and chicha de morocho in Ecuador. The molecular diversity of S. cerevisiae populations was determined by restriction polymorphism mitochondrial profiles. The beverages were characterized based on their physicochemical parameters. Twenty-six species were identified, and the most prevalent species were S. cerevisiae and Torulaspora delbrueckii. Other yeast species were isolated at low frequencies. Among 121 isolates of S. cerevisiae, 68 different mtDNA molecular profiles were identified. These results showed that chichas are fermented by a high number of different strains of S. cerevisiae. Some other species provided a minor contribution to the fermentation process. The chicha presented generally similar physicochemical parameters to those observed for other traditional fermented beverages, and can be considered as an acid fermented beverage.

Selection of starter cultures for the production of sour cassava starch in a pilot-scale fermentation process

ABSTRACT Sour cassava starch (Polvilho azedo) is obtained from a spontaneous fermentation conducted by microorganisms from raw materials and fermentation tanks. This product is traditionally used in the baking industry for the manufacture of biscuits and Brazilian cheese breads. However, the end of fermentation is evaluated empirically, and the process occurs without standardization, which results in products of inconsistent quality. Predominant microbiota from a cassava flour manufacturer was isolated in order to select starter cultures for the production of sour cassava starch in a pilot-scale fermentation process. Lactic acid bacteria and yeasts were isolated, enumerated and grouped by Restriction Fragment Length Polymorphism, and PCR fingerprinting, respectively. One isolate of each molecular profile was identified by sequencing of the rRNA gene. LAB were prevalent throughout the entire process. Lactobacillus brevis (21.5%), which produced the highest values of acidity, and Lactobacillus plantarum (13.9%) were among the most frequent species. Pichia scutulata (52.2%) was the prevalent yeast and showed amylolytic activity. The aforementioned species were tested as single and mixed starter cultures in a pilot-scale fermentation process for 28 days. L. plantarum exhibited better performance as a starter culture, which suggests its potential for the production of sour cassava starch.

Identification and selection of non-Saccharomyces strains isolate from brazilian apple must / Identificação e seleção de leveduras não-Saccharomyces isoladas de mostos de maçãs brasileiras

ABSTRACT: This study aimed to know the biodiversity of non-Saccharomyces yeasts in Brazilian apples must with potential to improve of the aromatic quality of ciders. The strains were isolated from thirty-five (35) Gala and Fuji apple musts from different locations from south region of Brazil. Forty-five (45) strains were isolate and identified by PCR analysis. Results indicated ten (10) species: Candida oleophila, Candida parapsilosis, Candida tropicalis, Clavispora lusitaniae, Hanseniaspora guilliermondii, Hanseniaspora uvarum, Lodderomyces elongisporus, Pichia anomala, Pichia fermentans and Rhodotorula mucilaginosa. The genus Rhodotorula sp., Lodderomyces sp. and Clavispora sp. constituted 71.2% of the strains identified. The following strains, C. oleophila, R. mucilaginosa, P. fermentans, H. uvarum and H. guilliermondii were selected in qualitative tests due the fruity aroma production by trained team in the aromatic assessment of cider.

RESUMO: Este estudo teve como objetivo conhecer a biodiversidade de leveduras não-Saccharomyces em maçãs com potencial para a melhoria da qualidade aromática da sidra brasileira. As cepas foram isoladas de trinta e cinco (35) mostos de maçã Gala e Fuji de diferentes locais da região Sul do Brasil. Quarenta e cinco (45) cepas foram isoladas e identificadas por análise de PCR. Os resultados indicaram dez (10) espécies: Candida oleophila, Candida parapsilosis, Candida tropicalis, Clavispora lusitaniae, Hanseniaspora guilliermondii, Hanseniaspora uvarum, Lodderomyces elongisporus, Pichia anomala, Pichia fermentans e Rhodotorula mucilaginosa. Três desses gêneros (Rhodotorula sp., Lodderomyces sp. e Clavispora sp.) juntos constituíram 71,2% das cepas identificadas. Entre estas cepas, C. oleophila, R. mucilaginosa, P. fermentans, H. uvarum e H. guilliermondii foram selecionadas em teste qualitativo devido a produção de aroma frutado, indicando potencial para a produção de compostos aromáticos na sidra.

Systemic infection by Spencermartinsiella sp. in a Nile crocodile (Crocodylus niloticus) / Infecção sistêmica por Spencermartinsiella sp. em um crocodilo do Nilo (Crocodylus niloticus)

A male adult crocodile (Crocodylus niloticus) was diagnosed with systemic yeast infection. Histologically, there were extensive areas of necrosis in the lung, which were associated with a diffuse severe lympho-plasmo-histiocytic inflammatory infiltrate, with numerous multinucleated giant cells, and myriads of intralesional pseudo-hyphae and yeast like organisms within distended foveolae. Necrotic foci were also observed in the mucosa of the digestive tract, trachea, tunica intima of arteries, liver, and heart, with a marked inflammatory lympho-histiocytic infiltrate, with large numbers of epithelioid macrophages and giant cells, and intralesional and intravascular pseudo-hyphae and yeast-like organisms. Oval yeast structures with 4 to 6 µm in diameter and 5 to 8 µm thick paralleled-wall pseudo-hyphae were observed in PAS or GMS stained sections. PCR with DNA template extracted from paraffin embedded tissues amplified the D1/D2 domains of the large subunit rRNA gene, which was sequenced and found to be identical to sequences of a new species, isolated from rotting wood in Brazil, of the genus Spencermartinsiella, which its closest relative is Spencermartinsiella cellulosicola.(AU)

Um crocodilo macho adulto (Crocodylus niloticus) foi diagnosticado com infecção fúngica sustêmica. Histologicamente, havia extensas áreas de necrose no pulmão, que estavam associadas com infiltrado inflamatório linfo-plasmo-histiocitário, com numerosas células gigantes multinucleadas e miríade de pseudo-hifas e organismos leveduriformes intralesionais, dentro de favéolas distendidas. Focos necróticos também foram observados na mucosa do trato digestório, traquéia, túnica íntima de artérias, fígado e coração, com acentuado infiltrado inflamatório linfo-histiocitário, com grande número de macrófagos epitelioides e células gigantes e hifas e organismos leveduriformes intralesionais e intravasculares. Cortes corados por PAS e GMS evidenciaram estruturas leveduriformes ovais com 4 a 6 µm de diâmetro e pseudo-hifas de paredes espessas e paralelas com 5 a 8 µm. PCR realizado com DNA extraído de material parafinizado amplificou os domínios D1/D2 da subunidade maior do gene rRNA, cuja sequencia foi idêntica a sequências de uma nova espécie, isolada no Brasil de madeira em decomposição, do gênero Spencermartinsiella, cuja espécie mais próxima é Spencermartinsiella cellulosicola.(AU)

The antimicrobial activity of lapachol and its thiosemicarbazone and semicarbazone derivatives

Lapachol was chemically modified to obtain its thiosemicarbazone and semicarbazone derivatives. These compounds were tested for antimicrobial activity against several bacteria and fungi by the broth microdilution method. The thiosemicarbazone and semicarbazone derivatives of lapachol exhibited antimicrobial activity against the bacteria Enterococcus faecalis and Staphylococcus aureus with minimal inhibitory concentrations (MICs) of 0.05 and 0.10 µmol/mL, respectively. The thiosemicarbazone and semicarbazone derivatives were also active against the pathogenic yeast Cryptococcus gattii (MICs of 0.10 and 0.20 µmol/mL, respectively). In addition, the lapachol thiosemicarbazone derivative was active against 11 clinical isolates of Paracoccidioides brasiliensis, with MICs ranging from 0.01-0.10 µmol/mL. The lapachol-derived thiosemicarbazone was not cytotoxic to normal cells at the concentrations that were active against fungi and bacteria. We synthesised, for the first time, thiosemicarbazone and semicarbazone derivatives of lapachol. The MICs for the lapachol-derived thiosemicarbazone against S. aureus, E. faecalis, C. gattii and several isolates of P. brasiliensis indicated that this compound has the potential to be developed into novel drugs to treat infections caused these microbes.

Colonização da dentina humana por Candida albicans / Human enamel colonization of Candida albicans

Introdução: a Candida albicans é um componente da microbiota indígena do indivíduo e pode colonizar o ambiente endodôntico. Objetivo: usando um modelo de infecção dentinária in vitro, avaliar o padrão de colonização da dentina por essa espécie microbiana, bem como a influência do tigmotropismo nesse evento. Métodos: foi utilizado um aparato composto por dois frascos de vidro conectados por um anel de silicone. Internamente, esses frascos eram se-parados por um disco de acrílico contendo um fragmento de dentina humana na sua porção central. Ambos os frascos foram preenchidos com caldo Sabouraud, mas Candida albicans foi inoculada no frasco superior. Após 72 horas a 37ºC, o aparato foi desmontado sob condições assépticas e o fragmento dentinário preparado para microscopia eletrônica. Resultados: a amostra de Candida albicans 1015 foi capaz de penetrar ativamente os túbulos dentinários, sendo as hifas a principal forma de crescimento durante a invasão primária dos túbulos dentinários. Células leveduriformes foram observadas nas camadas mais internas da dentina. Conclusões: a direção de ponta da hifa não foi influenciada pela natureza tubular da dentina. Nesse aspecto, somente o pleomorfismo tem um papel significativo na colonização da dentina humana por leveduras.

Leveduras isoladas de uvas Vitis vinifera L. cultivadas na região equatorial brasileira / Yeasts isolated from Vitis vinifera L. grapes cultivated in Brazilian Equatorial region

O Vale do Submédio São Francisco, localizado nos estados da Bahia e Pernambuco, é uma das regiões mais promissoras na produção de vinho no Brasil. É ainda desconhecida a possibilidade dessa região em produzir vinhos por fermentação espontânea e gerar produto com características típicas regionais. Neste estudo foram isoladas e identificadas as leveduras da superfície de uvas Vitis vinifera L. frescas, cultivadas na região do Vale do Submédio São Francisco, Brasil. Os isolados foram identificados pelas características morfofisiológicas, habilidade de crescimento em meio de cultura ágar L-lisina e identificação bioquímica, baseando-se em testes fisiológicos (habilidade de fermentação da glicose, assimilação de fontes de carbono e nitrogênio, osmotolerância e termotolerância). Sessenta isolados de leveduras foram obtidos no meio ágar extrato de malte-extrato de levedura (YM); e todos foram pertencentes ao grupo não-Saccharomyces. Por meio de testes fisiológicos, 20 dos 60 isolados não foram agrupados em nenhum gênero. 40 dessas leveduras foram sugestivamente identificadas como pertencentes ao gênero Hanseniaspora spp. Dessas 40 amostras, 17 receberam sugestiva identificação como pertencentes à espécie Hanseniaspora guilliermondi. Em conclusão, a microbiota da casca das uvas cultivadas nessa região é predominada por leveduras não Saccharomyces, especificamente Hanseniaspora spp.

Avaliação microbiológica, físico-química e sensorial de amostras de queijo minas artesanal, comercializadas em mercado público de Belo Horizonte, MG / Microbiological evaluation, physico-chemical and sensory of samples of cheese, sold in public market of Belo Horizonte, MG

A produção de queijo Minas a partir de leite cru é uma atividade tradicional em vários municípios de Minas Gerais. Geralmente o leite utilizado na fabricação do queijo artesanal não recebe nenhum tratamento para reduzir a carga microbiana. Esta condição se agrava se não houver higiene durante a elaboração do queijo e se este for transportado ou armazenado sem refrigeração adequada. O objetivo deste trabalho foi caracterizar a qualidade higiênico-sanitária, físico-química e sensorial de amostras de queijo Minas artesanal obtidas em mercados e feiras de Belo Horizonte, Minas Gerais...

Comparison between two selected Saccharomyces cerevisiae strains as fermentation starters in the production of traditional cachaça

Two Saccharomyces cerevisiae strains were tested as the starter yeasts in a traditional cachaça distillery. The strains used were S. cerevisiae UFMG-A829, isolated from a cachaça fermentation process, and S. cerevisiae K1-V1116, obtained from the wine industry. The permanence of each strain in the fermentation must was determined by RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA)-PCR, with primer M13. Both yeast strains were prevalent in the vats for approximately 30 days. Indigenous non-Saccharomyces and indigenous S. cerevisiae strains were isolated in lower counts during the fermentation period. Indigenous S. cerevisiae strains were molecularly distinct when compared to the starter yeasts. The two yeasts appeared promising starter yeasts in the fermentation process to produce traditional cachaça.

Duas linhagens de Saccharomyces cerevisiae foram testadas como iniciadoras em uma destilaria de cachaça. Foram utilizadas as linhagens de S. cerevisiae UFMG-A829, isolada de fermentação de cachaça, e S. cerevisiae K1-V1116, de origem vinícola. A permanência de cada linhagem durante a fermentação foi determinada por RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA)-PCR, utilizando o iniciador M13. As duas linhagens predominaram nas dornas de fermentação por aproximadamente 30 dias. Leveduras não-Saccharomyces e S. cerevisiae indígenas foram isoladas em menor proporção durante o experimento. As linhagens de S. cerevisiae indígenas apresentaram perfis moleculares distintos em relação às linhagens iniciadoras. As duas linhagens foram promissoras para serem utilizadas como iniciadoras do processo fermentativo para a produção da cachaça.

Influência de Saccharomycopsis schoenii e Saccharomycopsis crataegensis na produção de aflatoxinas B1 e G1 por Aspergillus parasiticus em amendoim (Arachis hypogaea L. ) / Saccharomycopsis schoenii and Saccharomycopsis crataegensis effect on B1 and G1 aflatoxins production by Aspergillus parasiticus in peanut (Arachis hypogaea L. )

As aflatoxinas constituem o grupo de metabólitos secundários produzidos principalmente pelos Aspergillus flavus, A. parasiticus e A. nomius. Foi investigado o efeito isolado das leveduras Saccharomycopsis schoenii e S. crataegensis na produção de aflatoxinas B1 e G1 em amendoim, cultivar IAC Caiapó. As amostras de amendoim in natura e previamente autoclavadas foram inoculadas com A. parasiticus (1,6 x106 esporos.mL-1) e cultura das leveduras (1,6 x 108 células.mL-1), seguido de incubação a 25ºC durante sete dias. Foram realizados dois experimentos: no primeiro o fungo filamentoso e as leveduras foram inoculados simultaneamente. No segundo, a levedura foi inoculada 3 h antes da adição de fungo filamentoso. A quantificação das aflatoxinas foi executada por cromatografia em camada delgada. A produção das aflatoxinas B1 e G1 foi reduzida na presença das leveduras. A porcentagem de redução da concentração das aflatoxinas foi maior quando a suspensão do fungo foi adicionada 3 h após a inoculação da suspensão de leveduras. O decréscimo da concentração de aflatoxina B1 atingiu 89,3% e 82,6%, respectivamente na presença de S.schoenii e de S crataegensis. Os níveis de aflatoxina G1 foram reduzidos em 91,2% na presença de S.schoenii e em 93,2% quando S.crataegensis foi inoculada.

Mastite por leveduras em bovinos leiteiros do Sul do Estado de Minas Gerais, Brasil / Mastitis caused by yeasts in dairy herds in the South of the Minas Gerais State, Brazil

O objetivo deste trabalho foi estudar a freqüência de infecções intramamárias ocasionadas por leveduras a partir de amostras de leite (n=1710) coletadas em 40 rebanhos leiteiros do Estado de Minas Gerais. Cinqüenta e seis estirpes de leveduras do gênero Candida e uma linhagem de Trichosporon loubieri foram isoladas. Candida albicans foi a espécie dominante (28,1 por cento das cepas), seguida por Candida parapsilosis (19,3 por cento), Candida catenulata (14,0 por cento), Candida glabrata (14,0 por cento) e Candida tropicalis (8,8 por cento). Infecções mistas foram detectadas em 29,8 por cento das vacas levedura-positivas. Amostras positivas para leveduras foram predominantemente obtidas (84 por cento) de vacas com mastite subclínica. A baixa taxa de isolamento de leveduras sugere que estes microrganismos não são relevantes para mastite bovina na região estudada.

The objective of this study was to report the frequency of intramammary infections by yeasts, in Minas Gerais State, from milk samples (n = 1710) collected in 40 dairy herds. Fifty six yeast strains of the genus Candida and one strain of Trichosporon loubieri were isolated. Candida albicans was the dominant species (28.1 percent of the strains), followed by Candida parapsilosis (19.3 percent), Candida catenulata (14.0 percent), Candida glabrata (14.0 percent), Candida tropicalis (8.8 percent). Mixed infections were detected in 29.8 percent of yeast-positive cows. The yeast infection was more frequent (84 percent) in cows with subclinical mastitis. The low rate of isolation of yeasts suggests that these microorganisms are not relevant to bovine mastitis in the studied region.

A potent trypanocidal component from the fungus Lentinus strigosus inhibits trypanothione reductase and modulates PBMC proliferation

The fungus Lentinus strigosus (Pegler 1983) (Polyporaceae, basidiomycete) was selected in a screen for inhibitory activity on Trypanosoma cruzi trypanothione reductase (TR). The crude extract of L. strigosus was able to completely inhibit TR at 20 µg/ml. Two triquinane sesquiterpenoids (dihydrohypnophilin and hypnophilin), in addition to two panepoxydol derivatives (neopanepoxydol and panepoxydone), were isolated using a bioassay-guided fractionation protocol. Hypnophilin and panepoxydone displayed IC50 values of 0.8 and 38.9 µM in the TR assay, respectively, while the other two compounds were inactive. The activity of hypnophilin was confirmed in a secondary assay with the intracellular amastigote forms of T. cruzi, in which it presented an IC50 value of 2.5 µ M. Quantitative flow cytometry experiments demonstrated that hypnophilin at 4 µM also reduced the proliferation of human peripheral blood monocluear cells (PBMC) stimulated with phytohemaglutinin, without any apparent interference on the viability of lymphocytes and monocytes. As the host immune response plays a pivotal role in the adverse events triggered by antigen release during treatment with trypanocidal drugs, the ability of hypnophilin to kill the intracellular forms of T. cruzi while modulating human PBMC proliferation suggests that this terpenoid may be a promising prototype for the development of new chemotherapeutical agents for Chagas disease.

Efeito do método de conservação na viabilidade, reativação, colonização intestinal e efeito imunomodulador de dois produtos* probióticos a base de leveduras / Effect of the conservation method on the viability, reactivation kinetic, intestinal colonization, and immunomodulation of two yeast-based probiotic products

Objetivo: O estudo teve como objetivos comparar a viabilidade, cineticas de reativação e de colonização intestinal, e efeito imunomodulador de dois produtos probioticos comercializados no Brasil nas formas liofilizada e em suspensão aquosa, contendo Saccharomyces boulardii e Saccharomyces cerevisiae, respectivamente.Metodos : As leveduras Saccharomyces boulardii e Saccharomyces cerevisiae foram fornecidas nas suas formas comerciais liofilizada e em suspensão aquosa, respectivamente. Os dois produtos são comercializados no Brasil e depois de obtidos em farmácia, eles foram codificados como as letras A (lote No 1040276, fabricado em março 2004) e B (lote N° 040 30 33, também fabricado em março 2004), respectivamente. Os experimentos foram iniciados em junho de 2004, sendo que os prazos de validade indicados nos produtos eram de março de 2006 e setembro de 2005 para os produtos A e B, respectivamente. Resultados: somente o produto A apresentopu contagens iguais ou superiores ao indicado na bula, sendo que esses níveis se mantiveram estáveis ao longo dos seis meses. Em conclusão, o produto A apresentou melhores características de viabilidade, reativação, colonização e imunomodulação e esses fatos devem ser ligados, em parte, aos métodos diferentes de conservação dos produtos probióticos.

Trophic state and microorganisms community of major sub-basins of the middle Rio Doce basin, southeast Brazil

A concentração de fósforo total foi utilizada para determinar o grau de trofia das principais sub-bacias do trecho médio da bacia do Rio Doce, em Minas Gerais, e variáveis físicas, químicas e microbiológicas da água foram analisadas nos períodos de chuva e seca durante os anos de 2000 e 2001. O estudo visou determinar mudanças na qualidade da água causadas pela sazonalidade e por diferentes atividades antrópicas. As áreas estudadas variaram de oligotróficas a eutróficas. As variáveis que apresentaram as maiores correlações positivas com a densidades de coliformes fecais foram as concentrações de nitrogênio e fósforo total, além disso, bactérias heterotróficas mostrou-se capaz de diferenciar os ambientes. Estes resultados sugerem a inclusão do grau de trofia e da caracterização das atividades antrópicas na bacia, como ferramentas importantes para a proposição de medidas de recuperação e conservação de trechos de rios sujeitos a impactos antrópicos.

Screening of Brazilian basidiomycetes for antimicrobial activity

A total of 103 isolates of basidiomycetes, representing 84 species from different Brazilian ecosystems, were evaluated for their antifungal and antibacterial activity in a panel of pathogenic and non-pathogenic microorganisms. Tissue plugs of the fruiting bodies were cultivated in liquid media and the whole culture extracted with ethyl acetate. Crude extracts from Agaricus cf. nigrecentulus, Agrocybe perfecta, Climacodon pulcherrimus, Gloeoporus thelephoroides, Hexagonia hydnoides, Irpex lacteus, Leucoagaricus cf. cinereus, Marasmius cf. bellus, Marasmius sp., Nothopanus hygrophanus, Oudemansiella canarii, Pycnoporus sanguineus, Phellinus sp., and Tyromyces duracinus presented significant activity against one or more of the target microorganisms. Eight isolates were active only against bacteria while three inhibited exclusively the growth of fungi. Two extracts presented wide antimicrobial spectrum and were active against both fungi and bacteria. Differences in the bioactivity of extracts obtained from isolates from the same species were observed.

Isolamento de leveduras apiculadas de crescimento em temoeraturas elevadas, a partir de Drosophila, na cidade do Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Apiculate yeasts with high growth temperatures isolated from drosophila in Rio de Janeiro, RJ, Brazil

Linhagens de Kloeckera africana, K.apis, K.japonica e K.javanica isoladas de Drosophila de florestas e de área periurbana de pomar, no Rio de Janeiro, RJ cresceram a temperatura mais elevadas do que descrito para leveduras apiculadas.Estas estirpes podem representar biótipos freqüentes em clima tropical, selecionados pelas temperaturas elevadas comuns na regiäo do Rio de Janeiro, Brasil.

Distribuiçäo de leveduras e coliformes em um lago do Karst do Planalto de Lagoa Santa-MG, Brasil / Yeasts and coliforms distribution in a paleo-Karstic lake of Lagoa Santa Plateau-MG, Brazil

Foi estudada a distribuiçäo de leveduras e coliformes totais e fecais em cinco estaçöes de coleta na Lagoa Olhos D'Agua, um lado do Karst do Planalto de Lagoa Santa, no Estado de Minas Gerais, Brasil, durante o período de março de 1986 a março de 1987. As leveduras foram isoladas em ágar Sabouraud modificado (glicose 2%, peptona 1%, extrato de levedura 0,5%, ágar 2%, cloranfenicol 20 mg% e pH 3,7-4,0 com HCI) e incubadas a 25§C, Os coliformes totais e fecais foram determinados pela técnica do número mais provável. Além disto, na zona limnética foram medidos os seguintes parâmetros físico-químicos: temperatura da coluna d'água, pH, condutividade elétrica, oxigênio dissolvido, fosfatos totais dissolvidos, sólidos em suspensäo e matéria orgânica dissolvida. A 1% de penetraçäo de luz, foram obtidas correlaçöes significativas entre as contagens microbianas e os teores de oxigênio dissolvido e fosfatos totais dissolvidos, sugerindo que estes fatores sejam importantes na regulaçäo das populaçöes microbianas neste ponto de amostragem. Nas profundidades de 100% e 10% de penetraçäo de luz näo foi observado nenhum padräo definido nas análises de correlaçäo. Em três estaçöes de coleta, o número de leveduras foi superior ao de coliformes fecais, sugerindo que as leveduras poderiam ser melhores indicadores do estado trófico de ambientes aquáticos